色譜柱是色譜分析過程中最重要的部分，相當于人體的“心臟”。根據自己要分析的樣品去選擇合適的液相色譜柱，需要考慮不同參數將會造成什么影響，比如粒徑、酸堿性、極性和分子量大小等。即使是液相色譜柱也分很多類型，比如正相、反相、C18柱、親水性色譜柱等等。
只有了解影響分析柱性能的因素，才能結合目標分析物的性質、需要達到的分析效果及實驗室條件來選擇適合的色譜柱。
一、硅膠基質填料
1、正相色譜 正相色譜用的固定相通常為硅膠(Silica)以及其它具有極性官能團，如胺基和氰基的鍵合相填料。由于硅膠表面的硅羥基或其它極性基團極性較強，因此，分離的次序是依據樣品中各組分的極性大小，即極性較弱的組份zui先被沖洗出色譜柱。正相色譜使用的流動相極性相對比固定相低，如正己烷，氯仿，二氯甲烷等。
2、反向色譜 反向色譜用的填料常是以硅膠為基質，表面鍵合有極性相對較弱官能團的鍵合相。反向色譜所使用的流動相極性較強，通常為水、緩沖液與甲醇、乙腈等的混合物。樣品流出色譜柱的順序是極性較強的組分zui先被沖洗出，而極性較弱的組分在色譜柱上有更強的保留。常用的反向填料有C18、C8、C4等。
二、聚合物填料 聚合物填料多為聚苯乙烯-二乙烯基苯或聚甲基丙烯酸脂等，其重要優點是在PH值為1-14均可使用。相對于硅膠基質的C18填料，這類填料具有更強的疏水性；大孔的聚合物對蛋白質等樣品的分離非常有效。現有的聚合特填料的缺點是相對硅膠基質填料，色譜柱柱效較低。
三、其它無機填料 其它HPLC的無機填料色譜柱也已經商品化，由于其特殊的性質，一般于特殊的用途。如石墨化碳黑正逐漸成為反向色譜柱填料。這種填料的分離不同于硅膠基質烷基鍵合相，石墨化碳的表面即是保留的基礎，不再需其它的表面改性。該柱填料一般比烷基鍵合相硅膠或多孔聚合物填料的保留能力更強。石墨化碳可用于分離某些幾何異構體，由于在HPLC流動相中不會被溶解，這類柱可在任何PH與溫度下使用。氧化鋁也可以用于HPLC。氧化鋁微粒剛性強，可制成穩定的色譜柱柱床，其優點是可以在PH高達12的流動相中使用。但由于氧化鋁與堿性化合物的作用也很強，應用范圍受到一定限制，所以未能廣泛應用。新型色譜氧化鋯基質填料也可用于HPLC。商品化的只有聚全物涂層的多孔氧化鋯微球色譜柱，應用PH1-14，溫度可達100℃。由于氧化鋯填料是zui近幾年才開始研究，加之面臨的實驗難度，其重要用途與優勢尚在進行之中。
柱效提高意味著在相同條件下可以選用更短的色譜柱，即相同的塔板數或分離能力，但是柱長更短，以縮短分析時間。另外，可以彩用低粘度的溶劑做流動相或增加色譜柱的使用溫度，比如用乙腈代替甲醇，以降低色譜柱的壓力。
